90.
(11) Номер патента: 2144566
(46) Дата публикации: 20.01.2000
(51) МПК7: C 12 Q 1/68, C 12 N 15/00, C 12 P 19/34, A 61 K 49/00
(21) Номер заявки: 99100157/13
(22) Дата подачи заявки: 05.01.1999
(71) Заявитель:
Институт цитологии и генетики СО РАН,
НИИ терапии СО РАМН
(72) Изобретатель:
Ромащенко А.Г.,
Михайлова С.В.,
Воевода М.И.,
Кобзев В.Ф.
(73) Патентообладатель:
Ромащенко Аида Герасимовна,
Михайлова Светлана Владимировна
(98) Адрес для переписки:
630090, Новосибирск, пр.академ, Лаврентьева, 10, ИЦиГ СО РАН, патентный отдел, Кучумовой Л.Я.
(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К ГЕМОХРОМАТОЗУ
(57)
Изобретение относится к биотехнологии, молекулярной биологии и медицине. Способ заключается в детекции полиморфных вариантов гена HLA-H (Cys282Tyr и His63Asp) методом полиморфизма длины рестрикционных фрагментов с использованием праймеров, фланкирующих участки гена, где локализованы соответствующие мутации с интродукцией в случае мутации His63Asp в один из праймеров сайта рестрикции нуклеазы Ksp221 для четкой дифференциации гомо- и гетерозиготных генотипов. Способ состоит в амплификации участков ДНК гена HLA-H, содержащих места возможного нахождения мутаций Cys282Tyr и His63Asp, с праймерами 5'CTACC-CCCAG-AACAT-CACCA-3' и 5'CTCCA-ATGAC-TAGGG-TGCCA-3' в случае мутации Cys282Tyr и праймерами 5'-CCCTC-TCCAC-ATACC-CTTGC-TG-3- и 5'-AAGCT-TTGGG-CTACG-TGGAT-GATCA-G- 3' в случае мутации His63Asp с последующим гидролизом первого из вышеназванных амплификатов рестриктазой Rsal, а второго - рестриктазой Ksp221, при этом анализ продуктов гидролиза амплификатов проводят в полиакриламидном геле. Способ отличается простотой и точностью диагностики и позволяет подвергать скринингу большие массивы образцов ДНК для распознавания лиц, предрасположенных к гемохроматозу. Диагностика данного заболевания до органического поражения внутренних органов позволяет успешно его лечить, предотвращая таким образом развитие цирроза и рака печени. 2 ил.
a - в случае гетерозиготы по данной мутации видны полосы ДНК длиной 126, 239 и 268 н. п.; б - в случае гомозиготы по нормальному аллелю - 126 и 268 н.п.; в - в случае гомозиготы по мутации Cys282Tyr - 126 и 239 н.п.
|
|
